cobas b 101 – POC stanovení CRP, HbA1c a lipidů

Stanovení HbA1c
Vzorek krve se naředí a promíchá s pufrem TRIS, aby se uvolnil hemoglobin z erytrocytů. Hemoglobin precipituje. Jedna frakce vzorku je vedena do reakční komůrky, kde se promíchá s laurylsulfátem sodným (SLS). SLS slouží k oxidaci hemoglobinu, při níž vzniká komplex laurylsulfátu sodného a chromoforu. Protože intenzita vzniklého zbarvení při vlnové délce 525 nm je přímo úměrná koncentraci celkového hemoglobinu ve vzorku, lze ji určit změřením transmise vzorku. Druhá frakce naředěného hemoglobinu je v prvním kroku denaturována. Aglutinátor způsobuje aglutinaci latexu potaženého specifickými monoklonálními protilátkami proti HbA1c. Tato aglutinační reakce způsobí zvýšení rozptylu světla, které lze měřit jako nárůst absorbance při vlnové délce 531 nm. HbA1c ve vzorcích plné krve soutěží o omezený počet vazebných míst latexu potaženého protilátkou, což vede k inhibici aglutinace a snížení rozptylu světla. Snížený rozptyl světla se měří jako pokles absorbance při 625 nm. Koncentrace HbA1c je poté kvantitativně vyjádřena pomocí kalibrační křivky transmise vztažené ke koncentraci HbA1c. 

Stanovení lipidů
Po aplikaci vzorku krve na disk a zavření krytu dojde k propíchnutí vestavěné diluční nádobky a uvolnění fosfátem pufrovaného fyziologického roztoku do směšovací komůrky. Erytrocyty ze vzorku kapilární krve se centrifugací oddělí od plazmy. V dalším kroku se pufr smísí se vzorkem plazmy a přenese kanály systému fluidiky do reakčních komůrek. Přístroj provádí stanovení celkového cholesterolu a HDL cholesterolu enzymatickou metodou. Stanovení triglyceridů je enzymatická end-point metoda využívající různé enzymy. Při koncentraci triglyceridů <400 mg/dl se lipoprotein o nízké hustotě (LDL) vypočítá pomocí Friedewaldovy rovnice (v jednotkách mg/dl). Při koncentraci triglyceridů ≥400 mg/dl systém výpočet LDL cholesterolu neprovádí.

Stanovení CRP
Erytrocyty ze vzorku kapilární krve se centrifugací oddělí od plazmy. V následujícím kroku se vzorek plazmy naředí dilučním pufrem. Po přenosu naředěného vzorku plazmy do reakční komůrky se vzorek smísí s reagencií obsahující protilátku proti CRP a latex. CRP v naředěném vzorku plazmy se naváže na konjugát protilátky proti CRP s latexem. Koncentrace CRP se vypočítá měřením latexové aglutinační reakce při vlnové délce 525 nm a 625 nm.